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      DNase I footprinting assay(DNase I足跡分析實驗)

      服務簡介

      DNase I footprinting是一種精確鑒定DNA結合蛋白(如轉錄調控蛋白)在DNA分子上的結合位點的檢測方法。轉錄調控蛋白通過與啟動子區域結合來調控靶標基因的轉錄。目前,凝膠阻滯實驗(EMSA)和DNase I足跡分析實驗是重要的一套體外研究工具:凝膠阻滯實驗可以確定轉錄因子是否與DNA直接結合,而DNase I足跡分析實驗則可以精確鑒定其結合的DNA序列,從而幫助我們研究基因轉錄調控的機制。經典的DNase I足跡分析實驗需要使用同位素進行標記,不僅危險,而且費時、對操作者的技術要求高、成功率低。針對這種情況,本公司利用“熒光標記”結合ABI測序儀的方法來進行DNase I足跡分析實驗。優點是:由于可以進行DNA的精確定量,并可以在常規的實驗臺上面操作;可重復性要遠遠好于同位素操作;ABI測序儀的操作體系非常成熟,靈敏度高,重復性好。因此,熒光標記法更靈敏度,獲得的保護區域更清晰,圖片的質量更好。

      主要流程

      蛋白與探針結合 DNase I梯度酶切 ABI測序儀檢測 確定檢出的蛋白保護序列

      訂購信息

      服務項目

      說明

      周期

      探針制備及與蛋白結合

      客戶提供準確的DNA結合蛋白的序列范圍序列,或根據文獻設計探針合成

      1~2周

      DNase I梯度酶切

      需要進行反復摸索條件達到對DNA部分酶切的效果。

      1~2周

      ABI測序儀檢測

      檢測結果進行圖片與數據處理,確定檢出的蛋白保護序列,并提供可發表圖片。

      3~5個工作日

      客戶提供

      提供樣品
      1) 純化的蛋白;

      2) DNA樣品及引物序列;

      提供信息
      1) 提供EMSA結果圖及實驗參數以便于接下來的DNase I足跡分析實驗。
      交付結果
      1) 原始數據、結果圖片
      2) 完整的實驗報告(含實驗步驟、流程及試劑耗材廠家)
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